非病毒载体——细胞基因治疗技术新趋势
1999年，一名患有鸟氨酸转氨甲酰酶缺乏症的患者接受一剂携带校正基因的腺病毒载体注射，产生大规模免疫反应，导致多器官衰竭和脑死亡。这是基因治疗发展历史上第一例严重不良反应事件。由于1999到2002年遭遇的这一事故和其他临床挫折，基因治疗领域的投资在随后的几年中经历了急剧而持续的下降。
但与此同时，为了确保将外源DNA更安全地引入哺乳动物细胞和生物体中，技术革新仍在继续。例如，基因递送系统的改进使得细胞因子、siRNA和其他基因替代策略的递送更安全，且在体外、体内临床前和临床应用中都体现出了有效性。
分类和基本概念
广义的基因治疗的概念即将外源性基因递送到靶细胞，以调节、改变基因组的表达。主要有三种不同的方法（图1）。基因递送载体的主要特征和组成在很大程度上取决于使用的基因治疗方法（如表一）。
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基因增补：该方法通常用于面对遵循常染色体隐性遗传模式的遗传性疾病，最常用的多核苷酸为质粒 (pDNA)，而由质粒介导的转染通常只能保持1~2个月；另一种常用的为单链mRNA，它的稳定时间更短，仅约1小时。
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基因抑制：该方法主要用于沉默突变基因的表达。这这种情况常见于常染色体显性遗传之后的遗传性疾病模式。抑制序列可以是基于单链RNA的结构，如microRNA (miRNA)，或双链RNA结构，如小干扰RNA (siRNA)。
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基因编辑：用特定的基因编辑工具以永久性纠正突变基因，如CRISPR/Cas9。如CRISPR/Cas9的基因编辑工具可以用不同的载体进行递送，如pDNA、mRNA或核糖核蛋白 (RNP)复合物，以作用于不同的细胞区域。
